前言常見的亞硝胺類化合物 N-二甲基亞硝胺 (NDMA) 在各個領(lǐng)域都是引發(fā)高度關(guān)注的致癌物，其不僅在藥品中，而且在水中和食物(包括熏肉、烤肉、奶制品和蔬菜)中均有發(fā)現(xiàn)?！痘瘖y品安全技術(shù)規(guī)范》(2015 年版)[1] 將亞硝胺類列為化妝品禁用組分，同時化妝品限用組分列表中要求：仲鏈烷胺最大含量 0.5% 且不和亞硝基化體系一起使用以避免形成亞硝胺，產(chǎn)品中亞硝胺最大含量 50 μg/kg。事實上，亞硝胺類物質(zhì)的產(chǎn)生途徑除仲胺和亞硝化試劑的生產(chǎn)工藝原因以外，還可能來源于污染引入以及降解途徑。國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心于 2020 年發(fā)布的《化學(xué)藥物中亞硝胺類雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》[2] 中強調(diào)“亞硝胺類雜質(zhì)在人體中可接受限度較小，微量雜質(zhì)的檢測和控制難度大”，應(yīng)采取“避免為主，控制為輔的策略”。國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《化妝品安全評估技術(shù)導(dǎo)則(2021 年版)》[3] 中也提及亞硝基化合物屬于強致癌物，需要進行相應(yīng)的安全評估?？傊瑏喯醢奉惢衔锏拇嬖谳^為普遍、容易被引入，并且毒性大、檢測難，開發(fā)相應(yīng)的高效、高靈敏度檢測方法十分必要
 

　　《化妝品中 N-亞硝基二甲基胺等 10 種揮發(fā)性亞硝胺的測定氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》(GB/T 29669-2013) [4] 中提出了利用 GC-MS/MS分析化妝品中 NDMA 等十種揮發(fā)性亞硝胺的方法，該方法對 NDMA的定量限為 10.0 mg/kg；而 2021 年公布的《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中 N-亞硝胺類化合物的測定(征求意見稿)》(GB 5009.26) 中第二法 QuEChERS-氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法的定量限為 1 μg/kg。相比較而言，后一種方法中使用的 Agilent Bond Elut EMR-Lipid增強型脂質(zhì)去除產(chǎn)品使得樣品前處理更加簡便快速，并且結(jié)合安捷倫多模式進樣口 (MMI) 的溶劑放空模式，可進一步提升方法靈敏度。本應(yīng)用簡報介紹了一種使用 Agilent 7000D 三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)同時檢測化妝品中十種揮發(fā)性亞硝胺的方法。該方法使用Agilent Bond Elut EMR-Lipid 對洗發(fā)水樣品進行前處理，并結(jié)合多模式進樣口 (MMI)，實現(xiàn)了簡單、高靈敏度、準(zhǔn)確可靠的亞硝胺定量分析(目標(biāo)化合物及兩種內(nèi)標(biāo)的信息見表 1)。
 

　　實驗部分試劑和樣品亞硝胺標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)標(biāo)均購自百靈威科技有限公司，乙腈(質(zhì)譜純)購自 JT Baker。樣品購自本地超市。儀器和設(shè)備采用 Agilent 8890 氣相色譜系統(tǒng)和 7000D 三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，該儀器系統(tǒng)配備多模式進樣口 (MMI)、Agilent 7693A 自動液體進樣器和 MassHunter 數(shù)據(jù)處理工作平臺。目標(biāo)物的采集離子對選擇和碰撞能量優(yōu)化由 MassHunter Optimizer 自動優(yōu)化程序完成。
 

　　標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制將亞硝胺目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)品及其內(nèi)標(biāo)混合，使用乙腈配制成5.0–500 μg/L 的校準(zhǔn)標(biāo)樣，其中內(nèi)標(biāo)濃度為 100 μg/L，進樣至 GC-MS/MS 進行分析，并通過內(nèi)標(biāo)法進行定量。樣品前處理使用乙腈提取，并使用 EMR-Lipid 分散固相萃取進行凈化，詳細的樣品前處理流程見圖 1。簡言之，移取 1 g 樣品加入 5 mL 乙腈中振蕩提??；離心后取上層乙腈提取液加入 Agilent Bond ElutEMR-Lipid dSPE 增強型脂質(zhì)去除凈化管(部件號 5982-1010)中；振蕩離心后，將上清液倒入 Agilent Bond Elut EMR-LipidPolish 反萃管(部件號 5982-0101)中，以去除多余水分并改善分析物分配；再次振蕩離心；然后取 1 mL 上清液過有機相濾膜后，進樣至 GC-MS/MS 進行分析。
 

　　氣相色譜條件色譜柱： Agilent DB-HeavyWAX 毛細管柱，30 m × 0.25 mm，0.25 µm(部件號 122-7132)進樣口襯管： 單錐不分流超高惰性襯管，帶玻璃毛(部件號 5190-2293)進樣體積： 1.0 μL(不分流模式)；5.0 μL(溶劑放空模式)載氣： 氦氣，恒定流速，1.0 mL/min進樣口溫度： 程序升溫，初始溫度 60 °C，保持 0.16 min，以 900 °C/min 的速率升至 220 °C進樣方式： 不分流模式、溶劑放空模式(詳細方法開發(fā)過程參見安捷倫應(yīng)用簡報 5994-2222ZHCN[5])升溫程序： 40 °C 下保持 0.5 min，以 15 °C/min 的速率升至190 °C，再以 40 °C/min 的速率升至 260 °C，保持5 min
 

　　質(zhì)譜條件溶劑延遲： 5.5 min離子化方式： EI離子源溫度： 250 °C四極桿溫度： 150 °C接口溫度： 250 °C檢測模式： MRM(離子對信息見表 2)定量方法： 內(nèi)標(biāo)法，各化合物定性定量離子對見表 2